本发明提供了一种升麻中分离的吲哚生物碱化合物、制备方法及其用途，本发明提供的化合物为一种从升麻中分离的新的吲哚生物碱化合物，本发明还提供了含有该化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
1.一种新的吲哚生物碱化合物，其特征在于该化合物的结构式如下所示：ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>
2.权利要求1所述的化合物的提取方法，其特征为：(1)升麻根茎为原料，乙醇回流提取，回收溶剂，得浸膏；(2)浸膏用水溶解，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；(3)乙酸乙酯萃取物用硅胶低压柱层析，正己烷-丙酮梯度洗脱，收集洗脱液；(4)将步骤(3)收集的洗脱液用硅胶低压柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱，收集洗脱液；(5)将步骤(4)收集的洗脱液进行反相C18中压柱层析，以乙腈-水梯度洗脱，得到该化合物粗品，再通过高效制备液相纯化得到该化合物。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于步骤(1)中的乙醇为70％以上的乙醇。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于步骤(3)中的正己烷-丙酮梯度洗脱比例为：8∶1-6∶1-4∶1-2∶1-1∶1-1∶2。
5.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于步骤(4)中的氯仿-甲醇梯度洗脱比例为100∶0-80∶20。
6.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于步骤(5)中的乙腈-水梯度洗脱比例为70∶30-80∶20；高效制备液相纯化条件为：洗脱液为75∶25的乙腈-水，流速5ml/min。
7.权利要求1所述的化合物药学上可接受的盐，包括盐酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐或有机酸盐。
8.含有权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐及可药用辅料组成的药物组合物。
9.根据权利要求8所述药物组合物，其特征在于：所述药物组合物是片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、滴丸剂或贴剂。
10.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。技术领域
本发明涉及一种全新的吲哚类化合物及其制备方法和用途，具体涉及一种从升麻中提取分离的新的吲哚生物碱化合物、制备方法及其用途。
背景技术
升麻是我国著名的常用中药，地下根茎入药，其药用功效为清热解毒、升举阳气和发表透疹。民间主治头痛、牙痛、咽喉痛、麻疹及子宫脱垂等妇科疾病。在我国，升麻的药用价值早在《神农本草经》中就有记载，并被列为“上品”药材。升麻属植物的化学成分和药理活性一直是国内外研究热点。近十年来从其中分离得到三萜及其苷类、苯丙素类、色酮及其他类型化合物200多个。国际上对升麻中化学成分的研究主要集中在其环阿尔廷烷三萜类成份上，对其药理活性研究则以类雌激素、抗骨质疏松为主。在德国、日本、美国等发达国家都分别开发出了治疗更年期综合征和骨质疏松的药物。与国际上研究的热点不同，为了拓展升麻中化合物研究的新领域，充分利用我国升麻属植物资源，提取分离结构新颖的新化合物以及开发其新用途，发明人经过大量的实验研究，成功地从升麻中提取分离得到一种全新化合物，并惊奇地发现该化合物具有良好地抗肿瘤活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从升麻中提取分离到的新的抗肿瘤吲哚生物碱化合物以及该化合物的提取方法和应用。本发明提供了一种结构如下的新的吲哚生物碱化合物或其药学上可接受的盐。ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>本发明还提供该化合物的制备方法为：(1)升麻根茎为原料，乙醇回流提取，回收溶剂，得浸膏。(2)浸膏用水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取物。(3)乙酸乙酯萃取物用硅胶低压柱层析，以正己烷丙酮梯度洗脱，收集合并得到6个流份。(4)其中第二流份用硅胶低压柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱，共收集8份。(5)将这8份中的第2份进行反相C18中压柱层析，以乙腈-水梯度洗脱，得到该化合物粗品，然后通过高效制备液相纯化得到该化合物。步骤(1)中的乙醇为70％以上的乙醇；步骤(3)中的正己烷-丙酮梯度洗脱体系，洗脱剂的比例为：8∶1-6∶1-4∶1-2∶1-1∶1-1∶2；步骤(4)中的氯仿-甲醇梯度洗脱体系。洗脱剂的比例为100∶0-80∶20；步骤(5)中的乙腈-水梯度洗脱体系，洗脱剂的比例为70∶30-80∶20；步骤(5)中的高效制备液相条件，乙腈-水，75∶25，流速5ml/min。本发明还提供该化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明化合物的药物可接受的盐，特别是形成药学上可接受的无毒盐，包括盐酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、甲磺酸盐、有机酸盐等。可按照常规转化方法制备这些盐。本发明化合物作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物，含有生理有效量的该化合物及其药物可接受的盐，根据需要还可包括药物可接受的载体，所说的该化合物及其药物可接受的盐在组合物的重量比为0.1-99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1-99.9％。本发明的药物组合物以适合药用的制剂形式存在，这些制剂形式可以是：片剂、胶囊剂、口服液、合剂、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、滴丸剂、贴剂。本发明化合物为白色粉末， [ α ] D 20 = - 5.13 ( C 0.02 , MeOH ) , ]]>附图1为本发明化合物红外光谱数据：IR(KBr)vmax(cm-1)：3244，2957，1709，1619，1470，1227，1101，998em；附图2为本发明化合物高分辨质谱(HRTOF-ESIMS)(m/z：)407.2099[M+Na]+计算值(C26H280N2Na，407.2094)；附图3为本发明化合物氢谱谱图，附图4为本发明化合物碳谱谱图；附图5为本发明化合物HMQC谱图；附图6为本发明化合物HMBC谱图；附图7为本发明化合物H-HCOSY谱图。从碳谱(见附图4，表1)和氢谱(见附图3，表1)的信息观察，结合HMQC(见附图5)，该化合物有26个碳，含有羰基信号及苯环和双键信号，dragendorff反应阳性(碘化铋钾反应)，根据高分辨质谱提供的信息，确定分子式为C₂₆H₂₈N₂O，不饱和度为14，IR谱在3300-3200及1709，1619cm^-1出现强吸收，提示分子中含有酰胺片段，根据氢谱中苯环质子峰形特征，符合AABB自旋偶合系统。¹HNMR显示，-CH(CH₃)₂结构片段。结合H-HCOSY(见附图7)，推断出-CH₂-CH-CH₂-CH(CH₃)₂的结构片段，由烯键质子信号结合H-HCOSY及HMBC，推断出CH₃-C(CH₂)＝CH-CH-的结构片段，将这两个结构片段结合HMBC，确定该化合物结构。表1化合物的¹H和¹³C核磁共振数据(氘代DMSO，400MHz)ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="405"/>通过对本发明化合物进行体外抗肿瘤试验(Alamarxa0blue法)，发现本发明所述化合物具有较好的广谱抗肿瘤生物活性。
附图说明
图1：式I化合物的红外光谱；图2：式I化合物的高分辨质谱；图3：式I化合物的氢谱；图4：式I化合物的碳谱；图5：式I化合物的HMQC谱；图6：式I化合物的HMBC谱；图7：式I化合物的H-HCOSY谱。
具体实施方式
下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。制备例1xa0xa0制备化合物升麻(cimicifugaexa0rhizoma)根茎(5kg)为原料，原料粉碎后经80％的乙醇(按照8-10倍体积的溶剂量)回流提取3次，每次2小时，合并三次的提取液，回收溶剂，得浸膏；将浸膏用水混悬，依次用石油醚，乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物250g；乙酸乙酯萃取物用200～300目的硅胶柱层析，正己烷-丙酮梯度洗脱(8∶1-6∶1-4∶1-2∶1-1∶1-1∶2)，通过薄层色谱，检测流份中成分的洗脱情况，收集含该化合物的流份，合并减压浓缩蒸干；将制备的浓缩物40g再次用硅胶低压柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱(100∶0～80∶20)，通过薄层色谱检测，收集富含该化合物的成分，合并减压浓缩，得到浓缩物4g；将4g浓缩物进行反相C₁₈中压柱层析，以乙腈-水梯度洗脱(70∶30～80∶20m)，合并浓缩得到粗品90mg；通过高效制备液相乙腈-水(80∶20)反复纯化，得到化合物，经HPLC检测含量为99.2％。制备例2xa0xa0片剂称取制备例1所得化合物2克，100克淀粉，40克预胶化淀粉，9克羧甲基淀粉钠，充分混合均匀，过80目筛，加入95％乙醇适量制成软材，12目制粒，60℃干燥3小时，12目筛整粒，加入颗粒总重0.3％的硬脂酸镁，调整片重约150mg，压片，共制得1000片。制备例3xa0xa0胶囊剂称取制备例1所得化合物2克，淀粉50克，糊精49克，充分混合均匀，过80目筛，用95％乙醇制粒，过12目筛，填充于1号胶囊中，共制得1000粒。试验例1xa0xa0体外抗肿瘤试验1.材料：RPMI1640和DMEM培养液、青霉素、链霉素、胎牛血清购自Gibco公司，胰酶、MTT、DMSO购自Amresco公司。化合物：制备例1制备得到。2.试验过程：肿瘤细胞培养：H460人肺癌细胞、Hela人宫颈癌细胞株和MCF一7人乳腺癌细胞分别培养在含10％FBS的RPMI1640(含100u/mlxa0Penicillin以及100μg/ml的Streptomycin)培养基中，收集生长良好并取处于对数生长期的细胞用培养基配成密度为1×105个细胞/ml的细胞悬液，均匀地接种于96孔培养板中，每孔100ul(即每孔细胞个数为104个)，在5％CO2，37℃培养箱内培养24小时待细胞完全贴壁后，给药组用不同浓度的式1化合物处理，化合物终浓度分别为50μg/ml，40μg/ml，30μg/ml，20μg/ml，10μg/ml，5μg/ml，1μg/ml。同时设对照组和空白组，每组6个复孔，在5％CO2，37℃培养箱内培养48hr后，加入10μl的10mg/mlMTT使终浓度为0.05％，孵育4hr后，离心弃去上清液培养基，加入100μlxa0DMSO，在酶标仪上振荡60s后，于5∶70nm测定吸光度值。式1化合物对肿瘤细胞的抑制率计算：根据测得的吸光度值进行细胞的存活率计算，各测试孔的OD值减去空白组OD值(完全培养基加MTT，无细胞)，各重复孔的OD值取均数。细胞的存活率以T/C％表示，T为加药组细胞的OD值，C为对照组细胞的OD值。化合物对肿瘤细胞的抑制率以(1一T/C)％表示。3.试验结果：试验结果表明，本发明所述化合物对以上三种肿瘤均有比较显著的抑制作用(见表2所示)。表2式I化合物体外对三种肿瘤细胞株的IC50值ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>